- Publicatiedatum
- 31/08/1994
Samenvatting
Dit rapport beschrijft de methode-ontwikkeling en de prestatiekenmerken van een HPIC/UV-methode voor de bepaling van nitraat en nitriet in urine, maagsap, speeksel en bloedplasma van humane herkomst. Gedetecteerd wordt bij 208 nm waardoor voldoende selectiviteit voor nitriet en nitraat wordt verkregen t.o.v. chloride-, sulfaat- en fosfaat-ionen. Urine en maagsap worden op identieke wijze voorbewerkt door een deelportie van het monster te verdunnen met water en vervolgens chromatografisch te zuiveren over een SPE-kolomopstelling bestaande uit een C18-kolom die in serie geschakeld is met een IC/Ag+ kolom. De meetoplossing wordt onderzocht met HPIC/UV bij 208 nm. Nitriet blijkt in beide monstersoorten alleen kwalitatief te meten. De terugwinning voor nitraat in urine is gemiddeld 96% (N=25) voor het lage niveau van verrijken en gemiddeld 103% (N=8) voor het hoge verrijkingsniveau. Voor maagsap zijn deze resultaten respectievelijk gemiddeld 98% (N=12) voor het lage en gemiddeld 101% (N=4) voor het hoge niveau van verrijken met nitraat. De monstervoorbewerking van speeksel is eenvoudig. Na certifugeren wordt het monster verdund met water, nogmaals gecentrifugeerd en het supernatant onderzocht op nitriet- en nitraatgehalte. Zowel nitriet als nitraat zijn goed kwantificeerbaar. De terugwinning voor nitriet toevoegingen bedraagt gemiddeld 103% (N=12) voor het lage en gemiddeld 102% (N=4) voor het hoge niveau van verrijken. Voor nitraat is de terugwinning gemiddeld 102% (N=12) voor het lage en gemiddeld 103% (N=4) voor het hoge niveau van verrijken. De monster-voorbewerking van bloedplasma was het moeilijkst. Verschillende manieren zijn onderzocht om dit monstermateriaal te onteiwitten. Hiervoor zijn ultrafiltratie- en precipitatie-technieken getest. Uiteindelijk is het gelukt om met methanol de aanwezige eiwitten neer te slaan en vervolgens, na zuiveren van een deelportie van het supernatant over een C18-IC/Ag+ kolomopstelling, beide analyten kwantitatief te bepalen met HPIC/UV bij 208 nm. De resultaten voor terugwinningsexperimenten zijn goed en bedragen voor nitriet gemiddeld 100% (N=19) en voor nitraat gemiddeld 98% (N=34). De verrijkingen zijn voor bloedplasma alleen op het lage niveau van toevoegen uitgevoerd. De ontwikkelde methode van onderzoek is beschreven in SOP nr. ARO/385.
Abstract
This report describes the development and performance characteristics of a HPIC/UV-method for the determination of nitrate and nitrite in urine, gastric juice, saliva and blood plasma of human origin. Detection is at 208 nm which ensures adequate selectivity of nitrate and nitrite versus chloride-, sulphate- and phosphate-ions. Sample preparation of urine and gastric juice is identical and is done by diluting a test portion of the sample with water and subsequent chromatographic clean-up over a SPE column combination consisting of a C18-column coupled in series with a IC/Ag+ column. The test solution is analysed by HPIC/UV at 208 nm. For both sample types the nitrite results are only qualitative. Recovery for nitrate in urine is on average 96% (N=25) for the low spiking level and on average 103% (N=8) for the high spiking level. For gastric juice the average recovery results are 98% (N=12) and 101% (N=4) for the low and high nitrate spiking level respectively. For saliva the sample preparation is straight forward. The sample, resulting from initial centrifugation, is diluted with water, centrifugated once more where upon the supernatant is assayed for nitrite and nitrate content. Nitrite and nitrate both can be quantified adequately. Average recovery for nitrite spiked at the low level is 103% (N=12) and for the high level 102% (N=4). For nitrate these figures are 102% (N=12) for the low and 103% (N=4) for the high spiking level respectively. Sample preparation of blood plasma proved complicated. For the deproteization of this type of sample ultrafiltration and precipitation techniques were tested. In the end, protein precipitation with methanol and subsequent clean-up of a portion of the supernatant on a C18-IC/Ag+ column combination proved successful and both analytes were quantified by HPIC/UV at 208 nm. Results for recovery experiments are adequate with average values of 100% (N=19) for nitrite and 98% (N=34) for nitrate. For blood plasma, spiking experiments were carried out at the low enrichment level only. The procedure resulting of this study is described in SOP nr. ARO/385.
Resterend
- Grootte
- 0MB