- Publicatiedatum
- 31/07/1995
Samenvatting
Een van de controle-testen op bepaalde vaccins is de bepaling van residueel albuminegehalte m.b.v. Counter Current Electroforese (C.C.E.).C.C.E. is een techniek die gebaseerd is op electroforese, gecombineerd met immuno-precipitatie. Bij behandeling van de, in de test gebruikte, agarose-gelplaten met coomassie briljant blauwoplossing, worden de gevormde precipitaten donkerblauw gekleurd. Voor het aflezen van de agarose-gelplaat wordt, in de standaard testmethode, gebruik gemaakt van een detectiekast voorzien van een melkglasplaat waarin een verlichtingsbron (gloeilamp) is aangebracht. Gebleken is dat de precipitaten op een agarose-gelplaat van kleur veranderen, indien zij onder een bepaalde hoek worden beschenen met behulp van halogeenlicht. Hierbij wordt de detectie-grens met tenminste een factor 2 verlaagd. De detectie-grens van de referentie lag op basis van de oude afleesmethode op 1 mul albumine per liter runderserum. Daarnaast worden artefacten ten gevolge van aspecifieke achtergrondkleuring vermeden, waardoor de specificiteit van de detectie verbeterd is.
Abstract
One of the tests performed at the Department of Biologicals of the Laboratory for Medicins and Medical Devices is an assay for the detection of residual animal serum albumin (bovine serum albumin and ovalbumin) in vaccines. The method used is an immunoprecipitation test using Counter Current Electroforesis (C.C.E.). After electroforesis the precipitate of albumin and anti-albumin serum is stained by Coomassie Brilliant Blue. Traditionally the agarose-gels are visually inspected for the presence of stained precipitates using the light of a bulb shining through opal glass. This report describes the validation of a new detection technique. The agarose-gel is illuminated using two halogen lamps. Under this illumination the precipitates appear as little red lines.Using the traditional detection-method (light bulb) the detection-limit was 1 mul animal serum per litre vaccine. Using the new detection-method (halogen-lamps) the detection-limit is lowered by at least a factor 2. Furthermore, as a consequence of the elimination of background staining artefacts the specificity of the detection is improved.
Resterend
- Grootte
- 0MB