English Abstract The classical test for the detection of pyrogenic
contaminations in pharmaceuticals is the rabbit pyrogen test. The most
frequently occuring and most important pyrogenic contamination in biological
and biotechnological pharmaceutical preparations are bacterial endotoxins,
originating from the cellular wall of Gram-negative bacteria. There is an
alternative in vitro test for the detection of these bacterial endotoxins
available, the so-called LAL-test. However, due to some drawbacks, e.g.
interfering factors in some pharmaceuticals, this LAL-test cannot always be
applied as a suitable alternative for the rabbit pyrogen test. Experiments
were performed to determine the suitability of a so-called 'cytokine release
test' as an alternative for the rabbit pyrogen test. Cells of the monocyte
cell-line MonoMac-6 were incubated in the presence of several vaccines and
blood products, and the cytokine (IL-6 and TNFalpha) release promoting
activity of these vaccines and blood products was determined. The results
of the cytokine release test were then compared with the results of both the
LAL-test and the rabbit pyrogen test. Regarding some bacterial vaccines
both the cytokine release test and the LAL-test are considered to be
suitable alternatives for the rabbit pyrogen test.
Rapport in het kort
Voor veel parenteraal toe te dienen geneesmiddelen
dient partijgewijs te worden aangetoond dat zij niet pyrogeen
(koortsverwekkend) zijn. De meest voorkomende pyrogene verontreinigingen in
biologische en biotechnologische geneesmiddelen zijn bacteriele toxinen.
Met name endotoxinen afkomstig van Gram-negatieve bacterien zijn bekend om
hun pyrogene eigenschappen. De klassieke test voor de detectie van pyrogene
activititeit is gebaseerd op vergelijking van de rectale temperatuur van
konijnen, voor en na toediening van een te testen substantie. Circa twintig
jaar geleden is een in vitro test op bacterieel endotoxine ontwikkeld, die
voor veel geneesmiddelen kan dienen als alternatief voor de pyrogenentest:
de zogenaamde LAL-test (Limulus Amoebocyten Lysaat test). De LAL-test kent
echter een aantal beperkingen, waardoor het niet voor alle parenterale
geneesmiddelen geschikt is als alternatief voor de pyrogenentest. Onderzoek
is verricht naar de mogelijkheid een alternatieve in vitro pyrogenentest te
ontwikkelen, die is gebaseerd op de in vitro productie van cytokines (IL-6
en TNFalfa) door een humane monocyten cellijn (MonoMac-6). De resultaten
van het onderzoek wezen er op dat voor een aantal bacteriele vaccins zowel
de test op bacterieel endotoxine als de bepaling van cytokine-afgifte door
humane monocyten een goed alternatief kunnen vormen voor de pyrogenentest in
konijnen.
